Detection of the p53 Gene Mutation Using an Ultra-sensitive and Highly Selective Electrochemical DNA Biosensor

Authors

  • Luis Fernando Garcia-Melo Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I) https://orcid.org/0000-0001-9477-4178
  • Norma Andrea Chagoya Pio Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I) https://orcid.org/0000-0002-6335-2463
  • Miguel Morales-Rodríguez Universidad Politécnica del Valle de México https://orcid.org/0000-0003-1600-4914
  • Eduardo Madrigal-Bujaidar Instituto Politécnico Nacional
  • Eduardo O. Madrigal-Santillán Instituto Politécnico Nacional, “Unidad Casco de Santo Tomás” https://orcid.org/0000-0003-2264-4598
  • Isela Álvarez-González Instituto Politécnico Nacional https://orcid.org/0000-0003-4011-9121
  • Rosa N. Pineda Cruces Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)
  • Nikola Batina Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)

DOI:

https://doi.org/10.29356/jmcs.v67i1.1880

Keywords:

p53 gene, electrochemical DNA biosensor, doxorubicin, cyclic voltammetry

Abstract

Abstract. The p53 gene— “the guardian of the genome”—is responsible for maintaining the integrity of the genome, along with cell cycle regulation, apoptosis, and cell differentiation. New analytical devices are needed to recognize the main alterations this gene could suffer, since it is one of the most frequent in human cancer. For this reason, we developed an electrochemical DNA biosensor with high sensitivity and specificity to monitor the 175p2 mutation of the p53 gene. We modified a screen-printed gold electrode (SPGE) by immobilizing a thiolated DNA probe sequence with 11-mercaptoundecanoic acid to detect its complementary sequence through the hybridization reaction. Doxorubicin (Dox) was used to increase the sensitivity of the biosensor, and the entire process was evaluated using the Cyclic Voltammetry (CV) technique. The measurement range of the developed device is from 1 fM to 100 nM of the p53 gene mutation with a limit of detection (LOD) of 2.2 fM. In the presence of Dox, the LOD increased up to 175 aM, becoming one of the highest efficiency devices in the field. The electrochemical DNA biosensor selectively detects the p53 suppressor gene mutation; it distinguishes between different non-complementary and complementary sequences. Our results indicate a high potential of our sensor for the p53 gene 175p2 mutation detection, which is convenient in the early diagnosis of diseases related to this gene.

 

Resumen. El gen p53—“guardián del genoma”—es responsable de mantener la integridad del genoma, así como de la regulación del ciclo celular, la apoptosis, y la diferenciación celular. Es necesario desarrollar nuevos dispositivos analíticos para reconocer las principales alteraciones que este gen podría sufrir, ya que es uno de los más frecuentes en el cáncer humano. En este sentido, se desarrolló un sensor electroquímico de ADN de alta sensibilidad y especificidad para identificar la mutación 175p2 del gen p53. Para ello, se formó una monocapa sobre un electrodo de oro que contenía secuencias sonda de ADN tiolado junto con ácido 11-mercaptoundecanoico, las cuales se emplearon para detectar la mutación del gen a través de la reacción de hibridación. Finalmente, se utilizó doxorrubicina (Dox) para aumentar la sensibilidad del biosensor; el proceso se evaluó mediante la técnica de Voltamperometría Cíclica (VC). El rango de medición del dispositivo desarrollado es de 1 fM a 100 nM de la mutación del gen p53 con un límite de detección (LOD) de 2.2 fM. En presencia de Dox, el LOD aumentó hasta 175 aM, convirtiéndose en uno de los dispositivos de mayor eficiencia en el campo. El biosensor electroquímico de ADN detecta selectivamente la mutación del gen supresor p53 y es capaz de distinguir entre diferentes secuencias complementarias y no complementarias. Nuestros resultados indican un alto potencial del biosensor para la detección de la mutación 175p2 del gen p53, lo cual es conveniente en el diagnóstico oportuno de enfermedades relacionadas con este gen.

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Author Biographies

Luis Fernando Garcia-Melo, Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)

Laboratorio de Nanotecnología e Ingeniería Molecular, Área Electroquímica, Departamento de Química, CBI.

Norma Andrea Chagoya Pio, Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)

Laboratorio de Nanotecnología e Ingeniería Molecular, Área Electroquímica, Departamento de Química, CBI.

Miguel Morales-Rodríguez, Universidad Politécnica del Valle de México

División de Ingeniería en Nanotecnología

Eduardo Madrigal-Bujaidar, Instituto Politécnico Nacional

Laboratorio de Genética, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Eduardo O. Madrigal-Santillán, Instituto Politécnico Nacional, “Unidad Casco de Santo Tomás”

Laboratorio de Medicina de Conservación, Escuela Superior de Medicina

Isela Álvarez-González, Instituto Politécnico Nacional

Laboratorio de Genética, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Rosa N. Pineda Cruces, Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)

Laboratorio de Nanotecnología e Ingeniería Molecular, Área Electroquímica, Departamento de Química, CBI.

Nikola Batina, Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa (UAM-I)

Laboratorio de Nanotecnología e Ingeniería Molecular, Área Electroquímica, Departamento de Química, CBI.

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2023-01-01

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Section

Regular Articles